马建平 李文 柳玉强

(宝鸡市中医医院消化内科，陕西 宝鸡 721000)

幽门螺旋杆菌(Hp)感染是慢性胃炎、胃溃疡、胃癌等疾病的主要危险因素[1]。干细胞转录调控因子Sox2在维持与调节肿瘤干细胞的增殖能力、自我更新等方面发挥重要作用，可能参与胃癌的发生[2]。细胞周期蛋白D1(CyclinD1)是一种细胞周期正向转换因子，在细胞G1期增殖过程中发挥调节作用，其过度表达可促进细胞异常增殖，导致肿瘤发生[3]。但目前Hp感染，Sox2、CyclinD1蛋白表达在上消化道疾病发生、发展中的作用及相关性尚不明确。本文主要探讨上消化道疾病患儿胃组织中Hp感染与Sox2及CyclinD1表达的相关性。

1.1一般资料 选取2018年1月至2019年2月我院收治的上消化道疾病患儿151例，采用胃镜及病理学方法进行诊断，并将其分为慢性浅表性胃炎组(A组，n=35)、慢性萎缩性胃炎组(B组，n=33)、十二指肠球部溃疡组(C组，n=29)、胃溃疡组(D组，n=30)及胃癌组(E组，n=24)。所有患儿经胃镜检查确诊，初次发病，病例资料完整，患儿监护人对本研究内容均知情同意，且既往未接受过Hp清除治疗或手术治疗；
排除深度昏迷或意识不清楚不能配合研究的患儿；
合并重要脏器疾病者；
入组前2周使用过抗菌药物等。其中男89例，女62例；
年龄2～12岁，平均(6.48±2.56)岁；
病程4～18个月，平均(5.42±1.21)个月。五组患儿一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2主要试剂及仪器 Sox2、CyclinD1多克隆抗体(英国Abcam公司)、免疫组化试剂盒(上海瓦兰生物科技有限公司)、CUT4062型石蜡切片机(德国SLEE公司)、YD-A型生物组织摊片机(德国Lecia公司)等。

1.3方法13C呼气试验：患者空腹状态下口服13C-尿素，到100 mL后测气，连接检测仪后进行检测，DOB值>2.5时为阳性。改良Giemsa染色：在胃镜直视下取胃窦大弯侧近幽门2～3 cm处黏膜2块，胃体小弯侧近胃角2～3 cm处黏膜2块，4%多聚甲醛固定组织标本，进行Giemsa染色。Giemsa染色和13C呼气试验同为阳性者则判定为Hp感染阳性。通过免疫组化法检测胃组织中Sox2及CyclinD1蛋白的表达情况。取各组石蜡组织切片进行免疫组化染色检测。60℃条件下烤片约80 min，常规脱蜡、水化，高温高压条件下进行抗原修复，选择3%过氧化氢封闭，阻断内源性过氧化物酶。分别滴加20 μL兔抗人Sox2、CyclinD1多克隆抗体(浓度1∶200，4℃孵育、过夜)，滴加生物素化的IgG50 μL，37℃孵育、30 min，滴加抗生物素-过氧化物酶溶液50 μL，37℃孵育、30 min。DAB染色，同时在显微镜下观察、控制显色反应时间；
苏木素复染2 min，分化、脱水，最后中性树胶封片。光学显微镜下使用Image-pro plus软件分析各组织标本中Sox2、CyclinD1蛋白表达情况。Sox2、CyclinD1蛋白阳性着色均以细胞核中出现棕黄色或棕褐色为准，参照相关文献[4]，以半定量积分法判定染色结果。比较胃组织Hp感染与Sox2及CyclinD1蛋白表达之间的关系。

1.4观察指标 对不同类型上消化道疾病Hp阳性率、Sox2蛋白阳性率、CyclinD蛋白阳性率进行比较；
分析Hp与Sox2、CyclinD蛋白表达的相关性。

1.5统计学方法 采用SPSS21.0软件对数据进行分析，计数资料以n，%表示，行χ2检验，相关性分析采用Spearman相关检验P<0.05为差异有统计学意义。

2.1胃组织Hp阳性率及Sox2蛋白阳性率的比较 E组患儿胃组织Hp阳性率及Sox2蛋白阳性率均显著高于慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、十二指肠球部溃疡及胃溃疡组(χ2=7.008、19.654，P均<0.05)，其余组间比较无差异(P>0.05)。见表1。

表1 Hp阳性率及Sox2蛋白阳性率的比较[n(%)]

2.2CyclinD1蛋白阳性率的比较 E组患儿胃体CyclinD1蛋白阳性率显著高于慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、十二指肠球部溃疡及胃溃疡组(χ2=14.010，P<0.05)，其余组间比较无差异(P>0.05)；
同时，胃癌组胃窦CyclinD1蛋白阳性率显著高于慢性浅表性胃炎组(χ2=12.740，P<0.05)，其余组间均无统计学差异(P>0.05)。见表2。

表2 CyclinD1蛋白阳性率比较[n(%)]

2.3相关性分析 结果显示，Hp与Sox2蛋白表达呈明显负相关(r=-0.413，P<0.01)、与CyclinD1蛋白表达呈正相关(r=0.251，P<0.01)。

Hp感染多在儿童时期获得，具有迁延不愈的特点。本文结果显示，上消化道疾病患儿具有较高的Hp感染率(60.26%)，提示上消化道疾病的发生、发展可能与Hp感染有关。研究[5-6]发现，Hp感染可使细胞增殖与凋亡紊乱，胃癌相关基因突变、引起端粒酶活性增加，促进胃癌的发生，但清除Hp可控制萎缩性胃炎患儿的胃黏膜发生进一步萎缩。本文结果显示，不同类型上消化道疾病患儿Hp阳性率不同，胃癌组Hp阳性率显著高于慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、十二指肠球部溃疡和胃溃疡组，提示Hp感染参与上消化道疾病的发展。

Sox2是具有代表性的干细胞转录因子，且已被证实其突变和异常表达与多种恶性肿瘤有关[7]。研究[8]发现，Hp通过抑制Sox2蛋白的表达，导致胃黏膜萎缩和肠化生，进而增加胃癌发生风险。还有研究[9]发现，Hp感染可促进大量细胞因子产生，诱导Sox2甲基化，使Sox2蛋白表达减少，进而出现胃组织不典型增生。本研究结果显示，胃癌组Sox2蛋白阳性率显著低于慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、十二指肠球部溃疡和胃溃疡组，说明Hp感染与Sox2蛋白表达呈负相关，提示Hp感染可能通过下调Sox2蛋白的表达参与上消化道疾病的病变。

CyclinD1是一种细胞周期正向转换因子，正常组织中表达很低，过度表达后可促进细胞周期G1-S期转换，加速细胞周期，使细胞异常增殖，导致肿瘤发生。研究[10]发现Hp自身及其代谢产物有潜在的致癌活性，可导致CyclinD1基因突变、扩增，增加胃癌发生风险。本文结果显示，胃癌组CyclinD1蛋白阳性率显著高于慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、十二指肠球部溃疡和胃溃疡组，说明Hp感染与CyclinD1蛋白表达呈正相关，提示Hp感染可能通过上调CyclinD1蛋白的表达参与上消化道疾病的发生。

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