潘晨 周特

口腔癌(oral cancer，OC)是临床较为常见的头颈部恶性肿瘤之一，流行病学调查显示，我国OC发病率约为3.6/10万～8.0/10万，因OC患者细胞生长分裂速度较为缓慢，扩散转移晚，大部分患者确诊时已处于中晚期，丧失最佳治疗时机，5年生存率仅为50.0%[1-3]。因此，加强对OC研究尤为重要。新近研究提出[4-5]，免疫相关的细胞因子及其相关的调节因子可能参与OC发生、发展。CD4+/CD8+可有效反映机体局部细胞免疫功能。叉头状转录因子P3(forkhead box p3，Foxp3)在调节性T细胞发育、成熟中发挥着重要作用，可能引起肿瘤免疫逃逸[6]。生存素(Survivin)是一种细胞凋亡抑制蛋白，在前列腺癌[7]、胃癌[8]等多种恶性肿瘤组织中均呈异常高表达，但在老年OC诊断价值临床报道较少。本研究探讨Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA在老年OC、口腔溃疡中的表达，并分析其与病理特征的关系。

1.1 一般资料

选取2018 年1 月～2020 年12 月江汉大学附属黄陂区人民医院收治的85 例OC患者(OC组)及85 例口腔溃疡患者(溃疡组)。纳入标准：(1)OC组均经手术病理组织学证实为OC；
(2)溃疡组均符合《口腔黏膜病学》[9]中口腔溃疡标准，且均未发生癌变；
(3)两组年龄均>60 岁，且所有研究对象均签署知情同意书。排除标准：(1)伴有甲状腺功能亢进或减退、溃疡性结肠炎、血色病者；
(2)合并心脑肝肾等重要脏器器质性病变者；
(3)合并胃癌、结直肠癌或其他部位恶性肿瘤者；
(4)合并自身免疫系统疾病或全身感染性疾病者；
(5)伴有严重心理或精神障碍者。

1.2 主要试剂与仪器

乙二胺四乙酸(EDTA)(陕西晨明生物科技有限公司)；
流式细胞仪(FACS Calibur)、鼠抗人CD4-Per CP、CD8-PE单克隆抗体(BD公司，美国)；
酶联免疫吸附试验试剂盒(武汉云克隆科技股份有限公司)；
逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒(天根生化科技(北京)有限公司)。

1.3 实验方法

入院后清晨空腹取外周血6 mL，取其中2 mL，EDTA抗凝，免疫荧光染色和固定，采用流式细胞仪测定CD4+/CD8+；
取其中2 mL，常规离心处理[3 000 r/min离心12 min(离心半径10 cm)]，取上清液，采用酶联免疫吸附试验测定Survivin水平；
另取其中2 mL，采用RT-PCR法检测Foxp3 mRNA表达。

1.4 统计学分析

2.1 两组人口学资料、Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA比较

两组年龄、性别、体质量指数、饮酒史、既往史比较，差异无统计学意义(P>0.05)；
OC组吸烟史、Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA与溃疡组比较，差异有统计学意义(P<0.05)(表 1)。

表 1 两组人口学资料、Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA表达比较

2.2 OC不同病理特征者Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA比较

不同T分期、淋巴结转移、远处转移患者Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA比较，差异有统计学意义(P<0.05)(表 2)。

表 2 OC不同病理特征者Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA比较

2.3 Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA与T分期关系

采用Spearman进行相关性分析，结果显示，Survivin(r=0.836，P<0.001)、Foxp3 mRNA(r=0.749，P<0.001)与T分期呈正相关，CD4+/CD8+与T分期呈负相关(r=-0.772，P<0.001)(图 1～3)(赋值：1=T1，2=T2，3=T3，4=T4)。

图 1 Survivin与T分期相关性 图 2 Foxp3 mRNA与T分期相关性 图 3 CD4+/CD8+与T分期相关性

Survivin具有抗细胞凋亡、调节细胞分裂、抑制免疫系统等多重作用，与癌症血管生成、侵袭性、患者预后存在密切联系[10-11]，既往研究已证实[12]，其可作为肿瘤基因治疗靶标。本研究发现，老年OC患者Survivin水平显著高于口腔溃疡患者，并与T分期存在正相关关系，结合常建兰等[13]研究考虑机制可能在于Survivin通过降低半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9表达，抑制细胞凋亡相关的膜表面分子Fas介导的细胞凋亡抑制免疫系统，可促进癌细胞增殖，抑制癌细胞凋亡，从而达到加快OC发生、发展的目的。提示Survivin与老年OC发生、发展密切相关，有望成为老年OC诊治的新靶点。

T淋巴细胞是机体抗肿瘤过程中重要免疫细胞[14-15]，其中CD4+细胞可辅助机体抑制癌细胞异常增殖，CD8+细胞有助于评估机体免疫抑制状态程度，CD4+/CD8+下降可帮助癌细胞逃脱免疫监视，促使癌细胞进行性增殖[16]。通过对比研究可知，老年OC患者CD4+/CD8+水平低于口腔溃疡，与李斌等[17]研究相似，这可能是由于OC患者处于免疫抑制状态，利于癌细胞生存，故CD4+/CD8+水平较低，而口腔溃疡发生时存在炎症损伤，为抵抗感染，促进炎症修复，机体宿主天然免疫系统被激活，故CD4+/CD8+水平较高。本研究显示，CD4+/CD8+水平与老年OC及其病理特征有关，再次佐证了CD4+/CD8+可作为老年OC、口腔溃疡的鉴别标志物。本研究进一步提出，随T分期增加，老年OC患者CD4+/CD8+显著下降，推测提高CD4+/CD8+表达有助于抑制癌细胞侵袭转移能力，促进预后改善。

Foxp3是调节性T细胞的特异性标志分子，可通过某种作用机制，调控效应性T细胞免疫功能[18-19]。Kim等[20]研究显示，胆道癌患者肿瘤边缘浸润的FoxP3-CD4+辅助性T细胞密度可能与临床结局有关。本研究数据表明，Foxp3异常高表达可能增加老年OC发生风险，调控癌细胞恶性生物学行为，与吴慧等[21]观点基本一致，这可能归因于Foxp3表达通过影响癌细胞中血管内皮生长因子、白细胞介素10表达，促进新生血管形成，增加调节性T细胞对自身免疫系统的抑制功能，调节机体免疫监视功能，引起机体对肿瘤的免疫耐受，从而促进OC发生与发展。不同T分期、淋巴结转移、远处转移患者Foxp3 mRNA比较，差异有统计学意义，且Foxp3 mRNA与T分期呈正相关，这一结果表明Foxp3 mRNA高表达可能在老年OC恶性生物学行为中起着重要调控作用，采用基因靶向技术沉默Foxp3 mRNA表达，可能有助于促进患者病情改善，防治肿瘤恶性生物学行为的增强。

综上所述，老年口腔癌患者Survivin、Foxp3 mRNA表达升高，CD4+/CD8+降低，并与T分期、淋巴结转移、远处转移有关，有望成为评估肿瘤恶性生物学行为的标志物。但本研究样本量较小，且属单中心研究，有待进一步扩大样本量多中心研究Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA之间相互调控关系及可能作用机制，以期为老年OC联合靶向治疗提供科学支持。

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