薛 银，吴贇竑，袁 璐，柴 娟，朱 琳，吴雪军，张红丽，谢荣辉，陈 洁，张传亮，赵灵燕

(浙江省动物疫病预防控制中心，浙江 杭州 311119)

在“人病兽防、关口前移”的大背景下[1]，动物疫病预防控制机构作用愈发凸显。兽医系统实验室作为动物疫病预防控制机构的重要组成部分，承担着重大动物疫病(包括人兽共患病)的监测、检测、诊断、流行病学调查、风险评估和疫情信息的收集、汇总、分析、上报等技术性工作[2]，在动物疫病的预防和控制方面具有举足轻重的作用。兽医实验室的建立是有效维护动物健康、保持畜牧业经济收益的重要建设，同时对动物疫病进行实验室监测是遏制动物疫病传播的有效方式[3]。实验室检测能力比对是农业农村部加强兽医系统实验室管理的主要抓手，也是科学评价和提高实验室管理水平和检测能力的重要手段[4]。为加强浙江省兽医系统实验室能力建设，提升动物疫情监测预警水平，自2011年开始，浙江省每年组织市本级和县(市、区)两级实验室开展动物疫病预防控制系统兽医实验室检测能力比对，作为检验实验室检测能力的重要依据之一[5，6]，了解和掌握各实验室检测水平，并分析原因，查找不足，逐步改进，进一步提升检测能力水平。本文分析了2018—2021年浙江省的市、县兽医实验室检测能力比对结果，希望通过此项工作进一步加强浙江省兽医系统实验室能力建设，提升动物疫情监测预警水平。

1.1 比对项目 2018—2021年浙江省兽医系统实验室检测能力比对共设置检测项目20个(表1)，其中非洲猪瘟病毒核酸检测、布鲁氏菌病抗体检测分别涉及3次、A型口蹄疫抗体检测涉及2次。各设区市的市本级兽医实验室参加全部项目，各县(市、区)实验室每3年至少参加1次能力比对，具有非洲猪瘟检测授权的实验室至少参加非洲猪瘟病毒核酸检测项目，每次选择2～3个比对项目。

表1 2018—2021年浙江省兽医系统实验室检测能力比对项目

1.2 比对方法、标准和试剂 2018—2021年不同比对项目选取的方法、依据标准和所用试剂见表2。

表2 2018—2021年浙江省兽医系统实验室检测能力比对项目方法、标准和试剂

1.3 比对样品 由国家参考实验室提供或相应试剂公司生产，由浙江省动物疫病预防控制中心实验室验证、编号和分装，每个检测项目设5～6份盲样，各参考值样品数目不定。

1.4 比对样品和检测试剂盒递送 为保证检测的有效性，比对样品存放于-20 ℃低温冰箱，试剂盒按照要求存放。2018—2020年，比对样品均由各实验室专业人员到省疫控中心实验室领取。2021年由于新冠肺炎疫情影响，比对样品由省疫控中心于24 h内寄到各参加比对实验室。

1.5 评判标准

1.5.1 高致病性禽流感H5亚型Re-8株抗体检测、高致病性禽流感H7亚型抗体检测、O型口蹄疫抗体检测、H5亚型禽流感Re-11株抗体检测评判标准 全部比对样品效价检测值在参考值±1(包括参考值±1)范围内，判为结果正确；
有1个及以上样品效价检测值偏离参考值±2及以上，判为结果存在较大偏差。

1.5.2 A型口蹄疫抗体检测、布鲁氏菌病抗体检测(试管凝集试验方法)、新城疫抗体检测评判标准 全部比对样品效价检测值在参考值±1(包括参考值±1)范围内，判为结果正确；
有1个及以上样品效价检测值偏离参考值±1以上，判为结果存在较大偏差。

1.5.3 高致病性H7亚型禽流感病毒核酸鉴别检测、猪瘟病毒核酸检测、口蹄疫病毒和塞内卡病毒核酸鉴别检测、非洲猪瘟病毒核酸检测、小反刍兽疫病毒核酸检测、H5亚型禽流感病毒核酸检测、猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸通用型检测、口蹄疫病毒核酸检测、布鲁氏菌病抗体检测(c-ELISA方法)评判标准 全部比对样品检测值与参考值完全一致，判为结果正确；
与参考值不一致，判为结果存在较大偏差。

2.1 总体情况 2018年，共有52个市、县级兽医实验室(10个市级、42个县级)参加比对。2019年，共有50个市、县级兽医实验室(11个市级、39个县级)参加比对。2020年，共有67个市、县级兽医实验室(11个市级、56个县级)参加比对。2021年，共有77个市、县级兽医实验室(11个市级、66个县级)参加比对，参加比对的实验室数量整体呈上升趋势。2018—2021年参加比对实验室共检测盲样4 775份，检测结果正确样品4 649份，样品平均检测正确率为97.34%，2018—2020年样品正确率逐步提升，2020年达到97.83%，2021年样品正确率略有下降，为97.19%，见表3。

表3 2018—2021年各年度检测能力比对结果统计

2.2 不同检测项目比对结果 2018—2021年共开展了15个检测项目的比对，不同检测项目实验室正确率介于78.57%～100%，见表4。

表4 2018—2021年兽医实验室不同检测项目比对结果统计

续表

2.3 不同检测方法比对结果 根据检测的样品不同，检测类型分为血清学检测和病原学监测。血清学检测包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、血凝抑制试验(HI)、试管凝集试验(SAT)。病原学检测方法主要包括反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和荧光RT-PCR。以上检测方法基本涵盖了市县实验室检测的常用方法，不同检测方法的检测结果正确率平均值介于87.86%～93.36%，见表5。

表5 2018—2021年各年度不同检测方法比对结果统计

2018—2021年，参加比对实验室数量不断增加，由于检测项目不同，实验室正确率在73.08%～82.00%波动。与2015年实验室正确率55%[7]、2016年实验室正确率82.81%[8]、2017年实验室正确率56.36%[6]相比，总体的实验室正确率在不断提升，说明各级系统内兽医实验室检测能力和水平在不断提升。

从检测项目来看，浙江省每年设置的检测能力比对项目紧紧围绕农业农村部关于重大动物疫病防控要求和浙江省实际情况，重点突出禽流感、非洲猪瘟、口蹄疫等重大动物疫病，同时又结合市、县级实验室的常规工作，既突出重点又贴近实际。禽流感、口蹄疫、新城疫等抗体检测项目是各级实验室常规的检测项目，各参与比对实验室正确率保持在较高水平。2019—2021年连续3年，浙江省获得非洲猪瘟检测能力授权的所有市县兽医实验室均参加了非洲猪瘟病毒核酸检测比对，2019年全部正确，2020年和2021年各有3个实验室比对结果出现偏差，经分析可能与操作不当、阳性对照样品污染其他样品有关。随着非洲猪瘟检测量加大，实验室污染风险也随之增加，需进一步加强实验室生物安全防范。2018年和2020年都进行了A型口蹄疫抗体的检测，实验室正确率分别为96.15%和89.66%。

从检测方法来看，各检测项目选取的检测方法与国家疫控中心对各省级兽医系统实验室检测能力比对所用方法一致[4,9]。PCR类的检测样品结果正确率平均值达92.38%，其中荧光PCR的检测正确率最高，2020年H5亚型禽流感病毒核酸检测项目实验室正确率达到100%。这可能与荧光PCR检测为定性检测，仪器直接读取数据，人为干扰因素较少有关[10]。2020年新城疫抗体检测项目实验室正确率为86.67%，2021年H5亚型禽流感Re-11株抗体检测项目实验室正确率仅为78.57%，这与HI试验所用红细胞、血凝抗原需要实验室自行制备，结果需要操作人员人为判定，存在主观差异有关[11]。2018年和2020年布鲁氏菌病抗体检测项目实验室正确率分别为97.83%和88.89%，这与SAT需要操作人员主观判定结果，受操作熟练程度影响较大有关[12]。HI和SAT作为实验室常用检测技术，大部分实验室操作比较熟练，结果符合率稳定性较好，但仍有部分实验室出现问题，这是由于定量检测需要实验室人员的综合判定能力和经验，而机构改革后，实验室人员流动性较大、部分新进实验室人员工作经验不足，影响结果判定。2020年A型口蹄疫抗体检测有6个实验室的部分样品检测值与参考值存在较大偏差，这可能是由于ELISA检测方法又分为竞争ELISA、液相阻断ELISA等众多种类，部分实验室对不同检测方法检测熟练度欠缺、检测规范性和准确性不够，导致ELISA检测结果稳定性不高[13]。

通过近4年的检测能力比对工作，部分实验室还存在一些问题，主要表现在：一是部分实验室血清学检测规范性和准确性有待提高；
二是部分实验室的分子生物学检测技术需要加强；
三是原始记录和报告填写有待改进，参加比对的部分实验室存在检测结果报告表填报不规范，原始记录填写不完整、不准确、没有可追溯性，检测报告中检测标准引用错误、缺少关键信息等问题，需进一步改进提升。

下一步工作建议：一是加强人员力量培训，针对比对工作出现偏差的实验室，选派人员参加省级技术和理论知识轮训，切实提升实验室检测能力水平；
二是开展实验室检测能力飞行检查，在比对工作开展期间，省级选派相关技术人员抽检市、县实验室进行指导监督，帮助提升实验室检测能力；
三是进一步加强兽医实验室管理，实验室检测能力提升需要强大的软件和硬件支撑，建议进一步加强兽医实验室质量管理体系和生物安全体系建设，以适应新要求、新任务。

兽医实验室是动物疫病监测工作的核心能力之一，统计近4年的比对结果，浙江省基层兽医系统实验室整体检测水平不断提升，说明浙江省兽医系统实验室整体检测能力水平稳步提升，对浙江省动物疫病防控以及食品安全和公共卫生安全起到了重要技术支撑作用。同时要进一步查缺补漏，进一步提升检测能力和水平。

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