李成斌，陈超丽，丁志新，门 静，李成利

（西安万隆制药股份有限公司，陕西 西安 710119）

福司氟康唑（Fosfluconazole）[1]为氟康唑的单磷酸酯，在体内经水解生成氟康唑而起效。氟康唑广泛用于治疗各种念珠菌和隐性球菌病，半衰期长达30h，具有高效、低毒的优点，既可口服又可静脉给药，临床用于治疗深部真菌感染，效果良好，不良反应较轻[2]。氟康唑在水中微溶，溶解度约为2mg·mL-1，如制成小水针（5ml，200mg），必须提高溶解度[3,4]。福司氟康唑是通过结构修饰，形成氟康唑的酯化物，增加溶解度，提高生物利用率[5]的成功案例。福司氟康唑注射液由辉瑞公司开发并于2003年在日本上市。

曹卫凯[6]等人以氟康唑为起始原料，使用POCl3进行氯磷酸酯化，之后与苄醇进行缩合，得到中间体，将中间体用Pd/C催化，以NH4HCO2为氢供体，进行脱苄基，经过酸化，析晶，得到福司氟康唑。

图1 福司氟康唑合成路线图Fig.1 Synthesis route of fosfluconazole

该合成路线简单，起始物料便宜易得，其主要杂质是其合成起始物料氟康唑以及中间产物二苄酯。王琰[7]等人通过实验筛选，确定了pH值为5.0的H3PO4缓冲液-甲醇为流动相，210nm为检测波长进行有关物质的检查，但是笔者通过实验发现，中间体二苄酯未能得到有效的分离。

本文通过参考相关文献[7,8]，调整缓冲盐的浓度和pH值，优化色谱的条件，以0.01mol·L-1的NaH2PO4（pH值为5.5）-乙腈为流动相，梯度洗脱，对福司氟康唑，氟康唑和二苄酯进行测定，本方法专属性强，准确度好，可用于福司氟康唑含量及有关物质的质量控制。

1.1 仪器与试药

LC-20A型高效液相色谱仪（PDA检测器 日本岛津）；
LabSolutions工作站（岛津）；
电子天平（赛多利斯）。

CP225D氟康唑对照品（100314-201605，99.8%中国食品药品制品检定研究院）；
福司氟康唑对照品（AT12001，99.4%）、二苄酯对照品（AZ12001，96.6%），江苏倍达医药有限公司；
福司氟康唑原料（自制，FK-8001、FK-8002、FK-8003）；
乙腈（色谱级Fisher）；
NaH2PO4（AR国药集团化学试剂有限公司）。

1.2 色谱条件

色谱柱：岛津ODS色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流速：1.0mL·min-1，进样体积20μL，柱温为40℃,PDA检测器（210nm）

流动相：A相：0.01mol·L-1的NaH2PO4（pH值为5.5）；
B相：乙腈，梯度洗脱方法见表1。

表1 梯度洗脱方法Tab.1 Method of gradient elution

1.3 溶液的配制

1.3.1 稀释剂50%乙腈

1.3.2 对照溶液 精密称取对照品适量，分别配制1mg·mL-1福司氟康唑对照溶液，1mg·mL-1氟康唑对照溶液，1mg·mL-1二苄酯对照溶液。

1.3.3 系统适用性溶液 另取福司氟康唑对照品、氟康唑对照品、二苄酯对照品适量置于同一量瓶，配制成浓度分别为1、0.01、0.01mg·mL-1的混合溶液，作为系统适用性溶液。

1.3.4 福司氟康唑对照储备液 精密称取福司氟康唑对照品适量，置于10mL量瓶中，用稀释剂溶解并定容，制成5mg·mL-1，作为对照储备液。

1.3.5 福司氟康唑供试品储备液 精密称取福司氟康唑原料适量，置于10mL量瓶中，用稀释剂溶解并定容，制成5mg·mL-1，作为供试品储备液。

1.3.6 供试品溶液 精密称取福司氟康唑原料药10mg于10mL量瓶中，用稀释剂溶解并定容，作为供试品。

2.1 专属性实验

按照1.2项下的色谱条件，取空白溶剂（稀释剂）和各对照溶液、系统适用性溶液分别进样，记录色谱图。空白溶剂对测定无影响，待测物出峰顺序依次为：福司氟康唑，氟康唑，二苄酯，各组分分离良好，R值均大于1.5。

图2 系统适用性色谱图Fig.2 System suitability chromatogram

表2 专属性实验Tab.2 Separation of the components

2.2 检测限与定量限

取1.3.2项下福司氟康唑，氟康唑，二苄酯对照溶液，用稀释剂稀释至各样品主峰的响应值约为噪音水平的10倍及3倍，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见表3。

表3 检测限与定量限（ng·mL-1）Tab.3 Limits of detection and quantification（ng·mL-1）

由表3可知，本方法有着较高的灵敏度，可以有效检出杂质。

2.3 线性与范围

精密量取福司氟康唑对照储备液3mL，氟康唑对照溶液0.2mL，二苄酯对照溶液0.2mL置于同一10mL量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得线性储备溶液（线性6）。精密量取线性储备溶液5mL置于10mL量瓶中，作为线性5；
精密量取线性5溶液3mL置于10mL量瓶中，作为线性4；
精密量取线性4溶液3mL置于10mL量瓶中，作为线性3；
精密量取线性3溶液3mL置于10mL量瓶中，作为线性2；
将2.2项下配制的定量限溶液浓度作为线性1溶液。精密量取各线性溶液20μL注入色谱仪，记录色谱图。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，作线性回归。福司氟康唑浓度在0.05～1556.28μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系；
氟康唑浓度在0.02～20.70μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系；
二苄酯浓度在0.04～21.74μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。

表4 线性与范围Tab.4 Linearity and range

2.4 回收率

配制含福司氟康唑1000μg·mL-1、氟康唑200μg·mL-1、二苄酯含量为200μg·mL-1的回收率储备液。取福司氟康唑供试品储备液1.0mL，加入回收率储备液7.5mL，于10mL量瓶中，作为150%的回收率溶液；
取福司氟康唑供试品储备液1.0mL，加入回收率储备液5.0mL，于10mL量瓶中，作为100%的回收率溶液；
取福司氟康唑供试品储备液1.0mL，加入回收率储备液2.5mL，于10mL量瓶中，作为50%的回收率溶液。精密量取各溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，计算回收率。福司氟康唑、氟康唑和二苄酯的回收率分别为99.28%、97.03%和100.51%，回收率良好。

表5 加样回收率Tab.5 Result of recovery tests（n=9）

2.5 重复性试验

在同一实验室，照1.3.3配制6份样品，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。福司氟康唑、氟康唑和二苄酯的RSD分别为0.17%，0.43%和0.30%，重复性良好。

2.6 精密度试验

取线性5溶液，精密量取20μL注入液相色谱仪，进样6针，记录色谱图。福司氟康唑、氟康唑和二苄酯的RSD分别为0.05%，0.13%和0.32%，精密度良好。

2.7 溶液稳定性试验

取线性5溶液，在室温下分别放置2、4、6、8、12h，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。福司氟康唑、氟康唑和二苄酯的RSD分别为0.27%，0.30%和0.29%，样品溶液随放置时间的延长有关物质均无明显变化，溶液配制12h内稳定。

2.8 样品测定

照1.3.6项下的配制供试品溶液，按照本方法进样，结果见表6。

表6 样品检测（%）Tab.6 API detection（%）

2.9 讨论

（1）检测波长的选择 氟康唑在中国药典2020年版二部和文献有相关报道[9]，以260nm作为其检测波长，经对福司氟康唑、氟康唑和二苄酯以PDA检测器进行分析，测得在210和260nm均有较强的紫外吸收，在210nm处各杂质响应较260nm强，所以，本文选取210nm作为检测波长。

（2）杂质产生的途径 根据合成路线、反应原理以及福司氟康唑理化性质，福司氟康唑的主要杂质氟康唑来源于未完全除去的起始物料，以及福司氟康唑高温降解产物，二苄酯来源于合成反应的中间产物。

根据上述结果，可采用此方法对福司氟康唑中含量及有关物质进行质量控制，本方法专属性强，准确度高，可用于相关的检测。目前，中国药典2020年版并未收录该品种，因此，本文的研究结果对今后标准的起草提供了较强的科学依据。

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