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三棱-莪术组分配伍对子宫肌瘤大鼠白细胞介素的影响
2023-02-02 15:55:14 ℃张黎,徐秋霞,余成浩,李良文
子宫肌瘤虽然是一种良性肿瘤,但是病因复杂,除了目前普遍认为它是激素依赖性肿瘤,还与各种细胞因子、趋化因子、生长因子等有关,其中白介素IL-2、IL-6、IL-8、IL-11、IL-13、IL-17被证明与子宫肌瘤的发生发展有密切关系[1,2],在本实验中,通过检测子宫肌瘤大鼠血清中白介素的表达水平,探讨三棱-莪术组分配伍对子宫肌瘤大鼠相关炎症因子的调控机制。
1.1 动物
SD雌性大鼠,体重(180-220 g),由简阳达硕动物科技有限公司提供,许可证号:SCXK(川)2013-24。
1.2 药品试验
用三棱饮片(四川皓博有限公司,批号:160301,),莪术油(陕西昊辰生物科技有限公司,批号:EZ150801),桂枝茯苓胶囊(江苏康缘药业股份有限公司,批号:15110611512,)。己烯雌酚(成都西亚化工股份有限公司,批号:K9212),黄体酮注射液(浙江仙琚制药股份有限公司,批号:150610),盐酸肾上腺素注射液(远大医药有限公司,批号:160401)。
用蒸馏水溶解桂枝茯苓胶囊中的内容物,配制0.09 g生药/mL药液。按照文献[1]方法提取三棱总黄酮,并用蒸馏水配制成1 g生药/mL药液。乳化莪术油,配制成1 g生药/mL的药液。将以上三棱总黄酮与莪术挥发油1:1进行混合,分别配制三棱总黄酮-莪术挥发油组分配伍高、中、低组(66.7%、33.3%、16.7%)。
1.3 试剂与仪器
ELISA试剂盒,规格:96孔/盒,abcam生产,北京永辉生物科技有限公司进口分装,移液枪,大龙兴创实验仪器(北京)有限公司生产,枪头和EP管由美国Axygen公司生产。
2.1 分组
大鼠随机分为6个组,即空白组、模型组、阳药组(桂枝茯苓胶囊)、三棱-莪术组分配伍(高、中、低)组。
2.2 造模及给药
本实验根据文献[1]中的方法进行造模,大鼠适应性喂养后开始造模。空白组大鼠每周一、三、五下肢外侧肌肉注射生理盐水0.05 mL/只。空白组外,各组大鼠灌胃己烯雌酚药液(1.35 mg﹒(kg﹒d)-1,隔日肌注黄体酮注射液(1.0 mg/只),每周给予随机外界刺激,第4周开始,皮下注射盐酸肾上腺素注射液0.9 mg﹒(kg﹒d)-1。造模后给予各组大鼠相应受试物,阳药组给予桂枝茯苓胶囊药液10 mL﹒kg-1,S-E高组、S-E中组和S-E低组分别以66.7%、33.3%、16.7%的S-E药液10 mL﹒kg-1,共5周。
2.2 ELISA检测
按试剂盒说明书步骤,用ELISA法检测大鼠血清中ⅠL‐1α、ⅠL‐1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17、IL-18的浓度水平。
2.3 统计学处理
与空白组比较,阳药组、S-E中组的IL-1a明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.05);
与模型组比较,阳药组ⅠL‐1α明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.05)(见表1-1)。
与空白组比较,阳药组、S-E高组、S-E中组、S-E低组的IL-1b相近,无统计学意义(P>0.05);
与模型组比较,阳药组、S-E高组、S-E中组、S-E低组的IL-1b相近,差异无统计学意义(P>0.05)(见表1-1)。
与空白组比较,阳药组、S-E高组、S-E中组、S-E低组的IL-2明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.05);
与模型组比较,S-E低组的IL-2明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.05)(见表1-1)。
与空白组比较,S-E中组、S-E低组的IL-4明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.01);
与模型组比较,S-E中组、S-E低组的IL-4明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.05)(见表1-1)。
表1 -1 各组大鼠白细胞介素的比较(±S)
表1 -1 各组大鼠白细胞介素的比较(±S)
注:与空白组比较,* P<0.05,** P<0.01;
与模型组比较,∆P<0.05,∆∆ P <0.01。
?
与空白组比较,模型组、阳药组、S-E中组、S-E低组的IL-5明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.05);
与模型组比较,各组间的IL-5相近,差异无统计学意义(P>0.05)(见表1-2)。
与空白组比较,模型组、S-E高组、S-E中组、S-E低组的IL-6明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.01);
与模型组比较,各组间的IL-6相近,差异无统计学意义(P>0.05)(见表1-2)。
与空白组比较,各组间的IL-7相近,差异无统计学意义(P>0.05);
与模型组比较,各组间的IL-7相近,差异无统计学意义(P>0.05)(见表1-2)。
与空白组比较,模型组、阳药组、S-E高组、S-E中组、S-E低组的IL-10明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.05);
与模型组比较,S-E中组、S-E低组的IL-10明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.05)(见表1-2)。
表1 -2 各组大鼠白细胞介素的比较(±S)
表1 -2 各组大鼠白细胞介素的比较(±S)
注:与空白组对比,* P<0.05,** P<0.01;
与模型组对比,∆P<0.05,∆∆ P <0.01。
?
与空白组比较,S-E中组、S-E低组的IL-12明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.05);
与模型组比较,各组间的IL-12相近,差异无统计学意义(P>0.05)(见表1-3)。
与空白组比较,S-E中组、S-E低组的IL-13明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.05);
与模型组比较,各组间的IL-13相近,差异无统计学意义(P>0.05)(见表1-3)。
与空白组比较,S-E高组、S-E中组、S-E低组的IL-17明显升高,,差异具有显著统计学意义(P<0.05);
与模型组比较,各组间的IL-17相近,差异无统计学意义(P>0.05)(见表1-3)。
与空白组比较,S-E中组、S-E低组的IL-18明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.05);
与模型组比较,S-E中组的IL-18明显升高,差异具有显著统计学意义(P<0.05)(见表1-3)。
表1 -3各组大鼠白细胞介素的比较( ±S)
表1 -3各组大鼠白细胞介素的比较( ±S)
注:与空白组对比,* P<0.05,** P<0.01;
与模型组对比,∆P<0.05,∆∆P <0.01。
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子宫肌瘤的病理除了与类固醇激素密切相关以外,与机体本身的免疫功能也有关联[3]。其中,白介素细胞既能与血细胞共同作用完成造血,也能通过在白细胞之间传递信息,激活免疫细胞活性,达到调节免疫功能的作用。而是增强免疫细胞活性这一功能,被认为具有抗肿瘤的作用。在刘曾晶[4]等人对抗肿瘤中药方剂的规律总结中,三棱、莪术常相须为用来治疗肿瘤,能调节机体免疫,改善炎性微环境,抗血管新生,协同作用于肿瘤环境,抑制肿瘤侵袭和转移[5]。莪术、三棱相须使用首见于《经验良方》 ,张锡纯常用其治疗癥瘕、积聚的妇科疾病。“气之所积为积,阳之所聚为聚,积者阴气也,聚者阳气也”,《难经》中认为子宫肌瘤就属于癥积、瘕聚,癥积是为有形之邪,多在血分,瘕聚是为无形之邪,多在气分,治疗此病当以行气活血消癥为主。三棱、莪术则为治疗子宫肌瘤的常用药对,在对三棱-莪术组分配伍的研究中,三棱-莪术组分配伍能通过多种途径有效防治子宫肌瘤[6,7]。
子宫肌瘤与白介素细胞的相关研究报道比较少,子宫肿瘤的发展与某些炎性细胞因子的释放有关,涉及到IL-1、IL-2、IL-6、IL-17等,IL-2有明显的抗肿瘤的作用,IL-6同时具备促炎和抗炎的作用[1,8-10],其中IL-17能促进子宫肌瘤纤维化。在本实验中检测到子宫肌瘤大鼠血清中,白细胞介素ⅠL‐1α、ⅠL‐1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17、IL-18的表达水平在模型组中有明显的不同程度的升高,说明机体内有强烈的炎症反应,导致其中的炎症因子浓度增加,说明机体免疫功能发生改变与子宫肌瘤的发生有一定关系。用三棱-莪术组分配伍进行干预后,S-E(高、中、低)组中的白细胞介素又有进一步的升高,我们推测这可能因子宫肌瘤导致机体内有强烈的炎症反应,三棱-莪术组分配伍具有激活免疫细胞活性的作用,提高相关免疫因子的表达水平,增强机体免疫能力。
本实验结果提示子宫肌瘤的发生可能与血清中白介素细胞因子的表达改变有关,三棱-莪术组分配伍能有效治疗子宫肌瘤可能通过改善相关白介素细胞因子,促进其分泌,调节免疫细胞,从而引发免疫应答,提高免疫功能,达到抗肿瘤的效果,从而发挥治疗子宫肌瘤的作用。
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