李 斌，委 磊，叶得河，马永华

(甘肃农业大学 动物医学院，甘肃 兰州 730070)

近年来，随着我国经济高速发展和人们生活水平的不断提高，宠物饲养数量急剧增加。据《2019年中国宠物行业白皮书》统计，2019年全国城镇养犬人数为3 669×104人。如此庞大的饲养量更容易造成人兽共患病在人群中的传播。寄生虫是一种感染性病原体，感染人数超过全球总人口的四分之一，可导致各种慢性疾病，危害人类健康[1-3]。犬作为多种寄生虫的宿主，主要感染蜱虫、螨虫、虱子、跳蚤等体表寄生虫以及以吸虫、绦虫、线虫为主的体内寄生虫。犬的寄生虫病是危害犬类健康的一大类疾病[4-7]。有资料报道的犬蠕虫约有120余种，人畜共患的犬蠕虫病约54种[8]，如犬蛔虫、绦虫、华支睾吸虫等，这些寄生虫常常引起犬消瘦，营养不良，严重的可引起犬的死亡[9]。在养犬规模逐渐扩大的同时，犬类携带的某些人兽共患寄生虫病也成为威胁人类健康的一大隐患[10]。为了有效防治宠物犬传播寄生虫病，全球各地进行了大量流行病学调查，根据资料统计显示[8]，全球有很多个国家或地区进行了犬类寄生虫感染情况的调查，平均感染率为65.3%。我国的平均感染率在21.14%～67.2%之间，感染率最高的是华南地区67.2%，最低的是华东地区21.4%。

掌握一个地区犬的寄生虫感染情况，不仅可以为犬寄生虫的临床诊断和防治提供理论依据，同时对防治人兽共患寄生虫病具有重要意义。然而，近十年以来，没有兰州市犬肠道寄生虫感染情况的有关报道，本研究通过虫卵检查法和ELISA方法对兰州市宠物犬寄生虫感染情况进行调查，分析兰州市宠物犬肠道寄生虫感染情况和优势虫种，为兰州市的犬类肠道寄生虫感染性疾病的防治提供一定的数据支持。

1.1 材料

1.1.1 样品来源 样本来源于兰州市4个区的8家宠物医院、11家宠物店和4家宠物犬繁育中心，采集粪便并记录犬只年龄、驱虫史、饲养条件等相关信息，具体分组见表1。

表1 调查地点及样本数量

1.1.2 试剂及器材 饱和氯化钠；
镊子；
10 mL粪便采样管；
托盘天平；
沉淀管；
100目筛子；
McMaster虫卵计数板；
蒸馏水；
锥形瓶；
载玻片；
盖玻片；
移液枪(吉尔森公司)；
瑞士-姬姆萨染色液(珠海贝索生物计数有限公司)；
离心机(TL80-2型，姜堰市天力医疗器械有限公司)；
光学显微镜(LEICA DM500，德国徕卡显微系统有限公司)，ELISA蛔虫检测试剂盒(上海纪宁实业有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 漂浮法 在50 mL饱和氯化钠中加入5 g粪便样本，摇匀，然后用100目的筛子过滤，静置40 min；
接着用吸管在液面蘸取一滴于载玻片，盖上盖玻片后镜检。

1.2.2 沉淀法 在100 mL清水中加入5 g的粪便样本，摇匀后用100目的筛子过滤，滤液静置沉淀30 min，倒掉上清，再加水摇匀，再沉淀，反复操作直至上清透明后，用吸管吸取沉渣于显微镜下观察。

1.2.3 虫卵计数法 采用MacMaster法[11]。

1.2.4 瑞士-姬姆萨染色 滴加A液于涂片上，染色1分钟；
再将B液滴加于A液上，以洗耳球吹打，使两液充分混合，计时5 min后水洗，烘干，镜检。

1.2.5 数据分析 不同地区，不同年龄，不同场所组间数据比较采用χ2检验，P<0.05为差异显著。

1.2.6 犬蛔虫抗原酶联免疫试验 粪便的处理和具体操作过程按试剂盒说明书进行。标准品按梯度稀释(表2)。本试验分A、B两组进行，A组样本为48份粪检蛔虫阳性和42份粪检阴性样本，B组样本随机抽取90份粪检阴性样本。在酶标包被板最后分别设1号、2号、3号、4号、5号标准品和空白对照。最后测得各个样本的OD值。

表2 标准品的稀释

以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式。根据样本OD值和直线回归方程计算样本蛔虫抗原的实际浓度。

2.1 虫卵形态观察

2.1.1 犬弓首蛔虫 虫卵呈深黄色，亚球形，具有较厚的呈麻点状的卵壳，卵壳外表面粗糙，大小为(68～85)μm×(60～75)μm(图1A)。

2.1.2 狮弓蛔虫 虫卵近似圆形，卵壳厚而光滑，有时可见核体分化，虫卵大小为(49～61)μm×(74～86)μm(图1B)。

2.1.3 犬复孔绦虫 虫卵具有两层薄的卵壳，呈亚球形，直径35～50 μm，内含1个六钩蚴，虫卵前期一般以储卵囊的形式存在，囊壁较薄(图1C)。

2.1.4 泡状带绦虫 卵壳很薄，多已脱落；
胚膜呈辐射状，内含六钩蚴(图1D)。

2.1.5 犬钩虫 虫卵浅褐色，呈卵圆形，卵壳较薄，卵壳与卵细胞之间有明显空隙，大小为(56～75)μm×(34～47)μm(图1E)。

2.1.6 狐毛首线虫 虫卵呈棕黄色，两端有卵盖，壳厚光滑，大小为(52～61)μm×(27～30)μm(图1F)。

2.1.7 球虫 镜下可见淡黄色的卵囊，形状似球形或椭圆形，呈淡黄色，囊壁薄而光滑。卵囊平均大小为(22.5×19.3)μm(图1G)。

2.1.8 犬滴虫 形状为梨形、纺锤形(图1H)。在显微镜下可观察到犬滴虫呈“S”形前进，粪便放置时间越久，虫体的活动性越低，放置时间过长时，虫体死亡。

图1 寄生虫虫卵形态鉴定

2.2 宠物犬肠道寄生虫感染情况

由表3可知，兰州市宠物犬感染的寄生虫有犬弓首蛔虫，狮弓蛔虫，复孔绦虫，泡状带绦虫、钩虫、狐毛首线虫、球虫、滴虫等，消化道寄生虫的总感染率为20.11%，优势虫种有犬蛔虫和球虫，感染率分别为9.20%和4.21%，感染最低的是犬钩虫和狐毛首线虫，感染率分别为0.96%、0.57%。城关区感染率最低，感染率为16.91%，西固区感染率最高，可达23.85%，两地区感染率差异显著(P<0.05)。

表3 兰州市宠物犬肠道寄生虫感染情况

2.3 混合感染情况

本次调查发现，兰州市感染2种肠道寄生虫的宠物犬占总感染数的8.79%，以蛔虫和球虫混合感染为主，以绦虫和球虫为次，偶见弓首蛔虫和狮弓蛔虫混合感染。在本次调查中，发现2例感染3种肠道寄生虫的犬，占总感染数的2.20%，1例为蛔虫、钩虫、球虫混合感染，另1例为弓首蛔虫、狮弓蛔虫、球虫混合感染。未发现感染3种以上肠道寄生虫的宠物犬(表4)。

表4 混合感染情况

2.4 犬肠道寄生虫感染强度

球虫感染强度最高，最大EPG可达28 000，平均EPG为5 500，狐毛首线虫感染强度最低，最小EPG小于50(表5)。

表5 犬肠道寄生虫感染强度

2.5 不同年龄段的寄生虫感染情况

本调查显示(表6)，在兰州市，犬狮弓蛔虫的感染率要高于犬弓首蛔虫。犬蛔虫在犬的各年龄段都易感，主要感染幼犬，其中小于5月龄的犬感染率最高，为13.71%，其次为5～12月龄的幼犬，大于12月龄的成犬感染率最低，为5.74%。犬绦虫感染中，犬泡状带绦虫为优势虫种。其中，以大于12月龄的成犬感染最多，感染率为5.74%，5～12月龄幼犬感染率最低，为2.67%。各年龄段犬都可感染犬钩虫，

表6 不同年龄段寄生虫的感染情况

其中以小于5月龄的犬感染最多，感染率为1.14%，大于5月龄和5～12月龄的幼犬感染率较低，分别为0.82%和0.89%。狐毛首线虫对5～12月龄犬感染率最高，为0.89%，小于5月龄也易感，感染率为0.57%，大于12月龄的犬感染率为0。犬球虫的感染以小于5月龄的幼犬最为严重，感染率为6.29%， 12月龄以上的犬对球虫有一定的抵抗力，感染率为1.64%。犬滴虫的感染中，以小于5月龄的幼犬感染率最高，为2.29%，大于12月龄的成犬感染率最低，为0.82%。综上，小于5月龄宠物犬的感染率最高，为27.42%，其次为5～12月龄宠物犬，感染率为17.33%，大于12月的成犬感染率最低，为14.75%。小于5月龄的幼犬感染率显著高于大于12月龄的成犬(P<0.05)。

2.6 不同饲养环境对犬寄生虫感染的影响

宠物犬繁殖场的寄生虫感染率最高，为26.92%，宠物店犬寄生虫感染率次之，宠物医院犬感染率最低，为14.59%(表7)。宠物犬繁殖场感染率显著高于宠物医院门诊犬(P<0.05)。

表7 不同饲养环境的感染情况

2.7 犬蛔虫抗原酶联免疫试验

经计算，A组样本的回归方程为y=0.0486x-0.0171，R2=0.9981，可信度较高(图2)；
B组样本标准曲线的回归方程为y=0.0535x+0.1，R2=0.9924，可信度较高(图3)。

将测得的OD值代入回归方程，计算出样品浓度，然后乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。实际浓度≥27 pg/mL，判定为阳性。检测结果如下：

A组阳性数为50份，其中48份粪检阳性样本ELISA检测全部阳性，2份粪检阴性样本显示ELISA阳性；
B组阳性数为4份，其余全为阴性，与粪检结果吻合率为92.31%(48/52)。

图2 A组样本直线回归曲线

图3 B组样本回归曲线

3.1 检查方法对粪检结果的影响

在本次调查的过程中，粪检主要采用饱和盐水漂浮法和水洗沉淀法，2种方法任何1种检测出虫卵或虫体，认定其为阳性。在调查中发现饱和盐水漂浮法能够漂浮大多数虫卵，包括蛔虫、绦虫、钩虫、狐毛首线虫、球虫，黄占欣等[12]、杨建发等[13]也运用饱和盐水漂浮法检查虫卵取得了不错的效果。水洗沉淀法主要检查粪便中比饱和盐水比重大的虫卵和虫体。犬滴虫较难发现，与犬滴虫的形态结构有关，检查时需要将新鲜的粪便用生理盐水或蒸馏水稀释后观察，不可用饱和盐水漂浮法进行检测，可能因为饱和盐水能使虫体脱水失活，丧失运动型，从而容易漏检[14]。本调查中每份粪便样品都采用3种方法检测，提高了检出率，降低了试验误差，使调查结果更有可靠性。

由于市面上蛔虫ELISA检测试剂盒较成熟，即对180份样本进行蛔虫快速ELISA试剂盒检测。根据A组样本检测结果，47份粪检阳性样本在ELISA检测中显示全部阳性，说明本试剂盒可信度较高，对犬蛔虫的诊断具有一定的价值；
而在A组和B组的粪检阴性样本中出现ELISA检测阳性，显示在粪检过程中由于各种因素影响而存在漏检现象[15]。犬蛔虫抗原ELISA试剂盒操作简便、准确率较高，在临床诊断中具有一定的应用价值。

3.2 不同地区宠物犬肠道寄生虫感染情况的差异

通过对兰州市宠物犬肠道寄生虫感染情况的调查，结果显示其优势虫种为犬蛔虫，感染率为9.20%，犬钩虫和狐毛首线虫感染率较低。主要感染的原虫有球虫和滴虫，其中以球虫感染为主，犬滴虫感染率较低，可能与犬滴虫漏检率高有关[16]。据卢旺银等[17]于2008年6月-2009年5月调查显示，兰州市宠物犬消化道蠕虫感染率为18.75%，优势虫种为犬蛔虫，感染率13.81%。本次调查发现兰州市的优势虫种与之相符，但感染率有所降低，可能与近年来加强了对宠物犬寄生虫的防治有关。在兰州市4个区中，城关区的寄生虫感染率最低，可能与近几年城关区实施的文明养犬的政策有关；
七里河区和安宁区的感染率相近，西固区宠物犬的感染率最高，达到23.85%，可能与西固区的饲养环境[18]及宠主的驱虫意识差有一定的关系。

3.3 不同年龄对寄生虫感染的影响

在本次调查中，5月以下的幼犬感染率最高，大于12月龄的成犬感染率较低，可能因为幼犬的抵抗力低下，容易被寄生虫侵袭[19]，而成犬抵抗力强，寄生虫感染后呈体内带虫或隐性感染的现象[20]。有些寄生虫，如蛔虫，钩虫等可经垂直传播传染给幼犬[11]，从而大大增加了幼犬的感染率。犬绦虫在成犬的感染率较高，为6.56%，有资料显示，宠主饲喂被绦虫感染的生肉[21]，或在被虫卵、孕节污染的环境中牵遛更容易导致爱宠感染绦虫[22]。综上，在同样的生活条件下幼犬的感染率要明显高于成犬，所以应该逐渐完善宠物犬驱虫体系，加强饲养管理及宣传，降低幼犬的感染率。

3.4 不同饲养条件对寄生虫感染的影响

在本次调查中，共采集宠物犬繁殖场、宠物店、宠物医院(主要为家养宠物犬)等3个场所的样本，通过寄生虫的感染率来研究犬消化道寄生虫与饲养环境的关系。经调查发现，宠物繁殖场的设施设备差，饲养群体密集，没有基本免疫程序，为降低成本，用最廉价的食物饲养狗，这样的条件更容易感染寄生虫，所以宠物繁殖场的寄生虫感染率居高不下。宠物店的蛔虫感染率较家养宠物高，可能是宠物店饲养密度较高，存在交叉传染，且驱虫不科学所致；
而家养宠物犬的绦虫，及狐毛首线虫感染率较宠物店高，可能与宠物主人给宠物犬喂食生肉有关[23]，或宠主从网上订购宠物犬，使寄生虫高感染地区的犬只流通到兰州市。调查结果说明，宠物犬寄生虫的感染情况和饲养环境有很大的联系，干净、卫生、科学的饲养环境能够更有效降低寄生虫的感染率，所以宠物犬饲养过程中应该重点加强饲养环境管理。

人畜共患寄生虫不仅会影响犬只的健康，而且会对人类产生危害，如犬蛔虫和华支睾吸虫等[24]。如今，宠物犬和人类的关系越来越密切，人感染人兽共患寄生虫病的风险也越来越高。在本次调查中发现的人兽共患寄生虫有犬蛔虫(弓首蛔虫、狮弓蛔虫)、复孔绦虫、钩虫，滴虫等。犬蛔虫在兰州市感染率最高，所以在寄生虫的防治过程中，应重点加强犬蛔虫的驱虫次数及强度，目前，市场上对犬蛔虫作用较好的兽药有拜宠清、伊维菌素[25]、奥芬达唑干混悬剂[26]等。犬类主要通过消化道感染绦虫，因此，在定期驱虫的同时，应加强卫生管理，对犬舍、食具定期消毒，注意对其进行科学、合理的饲喂，忌吃生肉，不干净的食物，降低爱犬从消化道感染的风险。宠物犬感染寄生虫之后，要迅速带去宠物医院进行治疗，并对犬舍环境彻底消毒，将犬粪、污染物进行无害化处理，防止二次感染。

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