万娜娜,余德勉,张 钊,宋怀挺,梁观凤

(上海悦联生物科技有限公司，上海 201215)

关键字：稻瘟灵；
稻瘟酰胺；
气相

稻瘟灵是一种内吸性杀菌剂，耐雨水冲刷、药效显着、毒性低等。可用于浸泡稻种。正常使用条件下，对人、畜安全，对作物无药害。稻瘟灵主要防治稻瘟病，对稻瘟病具有预防和治疗作用。对水稻纹枯病、小球菌核病和白叶枯病有一定防效，同时可抑制稻飞虱的发生条件。

稻瘟酰胺是一个新颖的用于防治水稻稻瘟病的内吸性杀菌剂，是一种难溶于水、低毒白色无臭固体。稻瘟酰胺的作用机制是抑制黑色素的生物合成途径，通过抑制附着胞的渗透从而阻止稻瘟病菌的侵染。具有新颖作用机制，属于黑色素生物合成抑制剂(MBI)，在叶面和水下施用时防治稻瘟病效果极佳，且持效显著。该药性能稳定，持效期长，比较耐雨水冲刷，在稻田施药比较方便。

将稻瘟灵和稻瘟酰胺两个药剂以适当比例混配使用，可以降低水稻稻瘟病的防治成本，提高防治效果，延长施药周期，减少农民的种植成本。

现有文献报道，稻瘟灵气相分析方法[1-5]和稻瘟酰胺的气相[6-9]分析方法中部分采用填充柱分析，部分采用ECD检测器。由于现在气相分析主要以毛细管柱和FID检测为主，而目前还没有稻瘟灵和稻瘟酰胺同时分析的方法报道。由于50%稻瘟酰胺·稻瘟灵乳油为复配制剂，在实际生产中，如果两个组分单独测定易耗费时间。经过试验，摸索了一个在气相条件下同时测定稻瘟灵和稻瘟酰胺的分析方法。经过实验验证，此分析方法具有较好的准确度和精确度。

1.1 样品和试剂 丙酮：分析纯；
稻瘟酰胺标样：已知稻瘟酰胺质量分数≥98.0%；
稻瘟灵标样：已知稻瘟灵质量分数≥98.0%；
内标物：邻苯二甲酸二丁酯，应不含有干扰分析的杂质；
内标溶液：称取1.25g邻苯二甲酸二丁酯，置于250mL棕色容量瓶中，用丙酮溶解并稀释至刻度，摇匀。

1.2 仪器 气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器；
色谱柱：30m×0.32mm(i.d.)石英毛细管柱，内壁键合HP-5，膜厚0.25μm。

1.3 气相色谱操作条件 温度(℃)：柱温 230、检测器 270、气化器 270；
气体流量(mL/min)：载气(N2) 40、氢气(H2) 40、空气 400；
进样体积：1μL；
保留时间：内标物约为2.9min，稻瘟灵约为4.4min，稻瘟酰胺约为5.1min。

上述操作参数是典型的，可根据仪器特点对给定操作参数作适当调整，以期获得最佳效果。50%稻瘟酰胺·稻瘟灵乳油的气相色谱图(图1)。

1—内标物；
2—稻瘟灵；
3—稻瘟酰胺

2.1 标样溶液的配制 称取稻瘟酰胺标样0.08g和稻瘟灵标样0.16g(精确到0.000 2g)，置于同一25mL容量瓶中，用移液管加入10mL内标溶液，摇匀。

2.2 试样溶液的配制 称取50%稻瘟酰胺·稻瘟灵乳油样品0.5g(精确到0.000 2g)，置于25mL容量瓶中，用移液管加入10mL内标溶液，摇匀。

2.3 试样的测定 在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值的重复性，待相邻两针的响应值变化<1.0%后，按照标样溶液，试样溶液，试样溶液，标样溶液的顺序进行测定。

2.4 试样中有效成分质量分数的计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中的峰面积分别与内标溶液峰面积比值进行平均，试样中稻瘟灵(稻瘟酰胺)的质量分数X(%)按式(1)计算：

(1)

式中：

A1——标样溶液中稻瘟灵(稻瘟酰胺)与内标物峰面积比的平均值；

A2——试样溶液中稻瘟灵(稻瘟酰胺)与内标物峰面积比的平均值；

m1——稻瘟灵(稻瘟酰胺)标样的质量，g；

m2——试样的质量，g；

P——标样中稻瘟灵(稻瘟酰胺)的质量分数，%。

3.1 溶剂的选择 根据两种待测物质的溶解度性质，选择丙酮作为溶剂。

3.2 特异性 在检测条件下，对50%稻瘟酰胺·稻瘟灵乳油中內标物、稻瘟灵、稻瘟酰胺试样进行GC-MS分析，其quality值分别为99、94、93，>90，对50%稻瘟酰胺·稻瘟灵乳油试样及空白进行GC-MS分析，其稻瘟酰胺、稻瘟灵及內标物出峰条件无干扰，满足分析条件中的特异性要求。

图2 特异性测定 50%稻瘟酰胺·稻瘟灵乳油试样+內标物GC-MS色谱图

图3 特异性测定 空白样品GC-MS色谱图

图4 特异性测定 內标物GC-MS色谱图

图5 特异性测定 稻瘟灵GC-MS色谱图

图6 特异性测定 稻瘟酰胺GC-MS色谱图

3.3 分析方法的线性相关性实验 按照方法准确配制一系列不同浓度的稻瘟灵和稻瘟酰胺标样溶液，然后按照本文中2.3测定步骤进行分析检测，分别以稻瘟灵、稻瘟酰胺与内标的质量浓度比为横坐标，稻瘟灵、稻瘟酰胺与内标物峰面积比为纵坐标，计算一元线性回归方程和作线性相关图。线性相关性测定试验数据(表1)。

表1 稻瘟灵和稻瘟酰胺线性实验结果

稻瘟灵一元线性回归方程：y = 0.729 8x + 0.019 2，相关系数：R2=0.998 8。

稻瘟酰胺一元线性回归方程：y = 0.856 1x -0.119 6，相关系数：R2=0.998 6。

3.4 分析方法的精密度实验 任取一批50%稻瘟酰胺·稻瘟灵乳油，按本文中方法测定步骤连续测定稻瘟灵、稻瘟酰胺含量5次，分别计算其平均值、标准偏差、变异系数。精密度测定试验数据(表2)。

表2 稻瘟灵、稻瘟酰胺精密度实验结果

从精密度测定试验数据表中可以看出，从稻瘟灵精密度测定试验数据表中可以看出，稻瘟灵质量分数平均值33.74%，标准偏差0.145 6%，变异系数0.43%<浓度Horwits公式计算值0.78。稻瘟酰胺质量分数平均值16.64%，标准偏差0.084 8%，变异系数0.51%<浓度Horwits公式计算值0.87。此气相分析方法具有良好的精密度。

3.5 分析方法的准确度实验 选取准确称取5份空白试样，并分别加入定量的稻瘟灵、稻瘟酰胺标样，然后按本文中方法测定步骤测定稻瘟灵、稻瘟酰胺标样的加入量，同理论值进行比较，计算回收率。回收率测定中非分析物干扰空白试样代表性图谱(图7)，回收率测定试验数据(表3)。

图7 50%稻瘟酰胺.稻瘟灵乳油准确度空白试样测定代表性气相色谱图

表3 回收率测定实验结果

按照本文中规定的方法进行检测试验，稻瘟灵的回收率99.33%～100.91%之间，平均回收率为99.92%，稻瘟酰胺回收率在98.55%～101.42%之间，平均回收率为99.37%，符合工业生产和质量监督检验的要求。

本文建立的气相色谱分析方法能对50%稻瘟酰胺·稻瘟灵乳油中有效成分进行分离测定，且具有良好的线性、精密度和准确度，操作简便，符合农药产品的质量分析要求，适用于产品的质量检测和控制，可以作为稻瘟酰胺和稻瘟灵混配制剂的分析方法。

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